צביעת רקמות והכנת הדוגמאות לחיתוך בפראפיןבעבודה במעבדה אנו נחשפים לעבודה עם חומרים מסוכנים לבריאות.בחרתי הפעם לכתוב על צביעת רקמות על מנת שתדעו שאפשר גם אחרת – במקום להשתמש בקסילן, העלול להזיק לבריאותנו, אפשר להשתמש במוצרים הידידותיים שלנו בתהליך קיבוע רקמות בפראפין, להגיע לתוצאות מעולות וכל זאת תוך שמירה והגנה על עצמנו.לפני שאפרט על הפתרון המתאים להחלפת הקסילן, אתאר בכמה מילים את התהליך.
הכנת בלוק הפראפין והחיתוך במיקרוטום הינה עבודה רגישה ועדינה הדורשת מיומנות, ניסיון וסבלנות. אפשר להיתקל בבעיות כמו בלוק פראפין רך מידיי, קשה מידי או שביר, או כשהפראפין מכיל עדיין שיירי ממסים מהשלבים הקודמים בתהליך. קבלת תוצאות הדירות ויציבות אפשרית רק בשימוש בסולבנטים איכותיים, בפראפין שנבדק ומתאים במיוחד להיסטולוגיה וכמובן בעבודה בפרוטוקול נכון. כל אלה יכולים לחסוך הכנות חוזרות במידה וחלו תקלות במהלך התהליך, חסכון בזמן ובעלויות ושימוש נכון בדוגמאות חשובות ויקרות ערך.
חיתוך בעזרת מיקרוטום נעשה לרוב בעובי של 3-5 מיקרון, ולאחר מכן העברה בעדינות לאמבט מים חמים לשם ישור הקמטוטים שנוצרו מהחיתוך. משתמשים בסליידים מצופים בקולגן או בחומר אחר שמאפשר ספיחה טובה יותר של הדוגמה לסלייד, מכיון שהיא עלולה להחליק מהזכוכית וזה יכול להיות בעיתי לתפוס אותה שוב. לאחר שהדוגמאות התישרו ונאספו על גבי הסלייד מניחים אותן ליבוש. לאחר מכן ממיסים את הפראפין ב 70C, ומכאן ממשיכים לפי הפרוטוקול במעבדתכם עם אתנול, פרופנול, אצטון או לרוב – בקסילן:היתרון בקסילן הוא שבנוכחותו הפראפין עוזב את הדוגמה מהר מאד וביעילות (deparaffinization). תכונה זו של הקסילן הפכה אותו לממס הסטנדרטי בהיסטולוגיה. קיימות דרגות שונות של קסילן, כאשר שימוש בדרגות נמוכות יכול להשפיע על איכות הצביעה. ניתן להשתמש בקסילן שימוש חוזר, אך צריך תמיד לזכור ששימוש חוזר יכול להוריד את איכויות הצביעה, לכן יש להחליף אותו בחדש כשהצביעות עלולות להיפגע.
הבעיה בקסילן היא שהוא חומר מסוכן ומתלקח, מזיק לבריאות ולעור ומתאדה באויר בקלות עם ריח אופיני. במעבדות חובה שיהיה איוורור מתאים ועבודה עם קסילן חייבת להיעשות במנדף. ממסים ארומטים כמו קסילן ידועים ביכולתם לפגוע בכבד, במערכות המטופויטיות ולימפטיות בחשיפה אינטנסיבית.רשויות הבריאות והסביבה מחייבות אותנו לעמוד בדרישות הרגולטוריות המחמירות בעבודה בקסילן ומכאן עלה הצורך למצוא לו תחליף יעיל, ידידותי ולא ארומטי.
הפיתוח של חברת מרק הוא הריאגנט ®Neo-Clear, איזופראפין הבנוי משלד של שרשראות פחמניים רוויות אליפטיות (aliphatic hydrocarbon mixture with a chain length of C9-C11) .איזופראפינים מסוגלים להמיס את הפראפין, מה שבעצם הקסילן עושה, והינם בעלי אופי מעט שומני ולכן רגישים למגע עם מים. זהו חומר חסר ריח, שקוף, מסיס ברוב הסולבנטים האורגנים ואינו מסיס במים. במהלך הפיתוח הוכח כי השימוש ב ®Neo-Clear מביא לאותן תוצאות מצביעה בשימוש בקסילן אך ללא התופעות הבעיתיות שלו. כמו כן, ל ®Neo-Clear יש מידת אידוי נמוכה מזו של קסילן, מכאן שלא צריך לעשות שינויים בפרוטוקול.המבנה של ®Neo-Clear
היתרונות של ®Neo-Clear
* ללא סכנה בריאותית* תוצאות זהות לשימוש בקסילן* מעט מאוד שינויים בפרוטוקול אם בכלל* אורך חיי הדוגמה זהה* כמעט ללא השפעות סביבתיות
כדי להשיג תוצאות אופטימליות של צביעה מומלץ להשתמש ב Neo-Mount™ ל mounting, חומר שמותאם במיוחד להשלמת הצביעה שנעשית עם Neo-Clear®, מה שיבטיח קבלת צביעות ברורות וחדות. יש להיפטר מעודפי ה Neo-Mount™ ע"י הנחתם על גבי נייר ממברנה/סופג למשך דקה. לא קיים סיכון שהדוגמה תתיבש מכיון ש ®Neo-Clear לא מתאדה בקלות והוא מעט שומני.
תרצו להתנסות ב- Neo-Clear® או ב - Neo-Mount™?אם כן, פנו אלימירב [email protected]
מחברת המאמר, מירב גרבי הינה בוגרת תואר ראשון בביולוגיה B.Sc. ותואר שני M.Sc. בביוכימיה מאוניברסיטת בר אילן.• למירב גרבי ניסיון של 3 שנים בעבודת מחקר במחלקה ל Cellular and Developmental Biology בביה"ס לרפואה New York, Mount Sinai School of Medicine • במסגרת עבודה זו חקרה את ההבדלים בין Fibroblast growth factors -FGFs לבין FGF homologous factors FHFs ע"י השריית מוטציה בחלבונים רקומביננטיים והכנה פרפרטיבית של החלבונים לאנליזה בקריסטלוגרפיה.• למירב מומחיות בשיטות: ביולוגיה מולקולרית, יצירת קונסטרקטים , RT-PCR, PCR טרנספקיות וטרנספורמציות, ביטוי חלבונים בחידקים, מיצוי חלבונים, טיהור חלבונים בקולונות אפיניות להפרין, ניקל וגלוטטיון, פתרון בעיות אגרגציה ופרסיפיטציה של חלבונים, אנליזת חלבונים בשיטת ווסטרן, צביעות קומסי וצביעות כסף של ג'לים, טרנספקציה לתרביות תאים, מבחני MTT לתרביות תאים ועוד.• מ - 2006- מנהלת את תחום מדעי החיים בחברת מרקורי לאחר שבמשך כעשור ניהלה גם את תחום הכרומטוגרפיה • מירב גרבי השתתפה בקורסים והשתלמויות בתחומים: כרומטוגרפיה, מיקרוסקופיה ומדעי החיים בחברת Merck .