תאים רוכשים את יכולת הנדידה (migration) והפלישה שלהם (invasion) לרקמות אחרות כחלק מהתקדמות בהתמרה הסרטנית.אחת מהדרכים היותר מוכרות למבחני נדידה ופלישת תאים היא באמצעות Boyden chamber.
ישנם 3 סוגי תנועה של תאים אותם אנו בוחנים באמצעות האינסרטים:Chemotaxis/migration - תנועת תא דרך ממברנה ללא ציפוי(גדלי פורות 8um, 5um או 3um)Invasion - תנועת תא דרך ממברנה עם ציפוי מהצד הפנימיHaptotaxis – תנועת תא דרך ממברנה עם ציפוי מהצד החיצוני
הבדיקה מבוצעת באמצעות אינסרטים שמתלבשים על בארית גידול, האינסרטים מכילים ממברנה עליה זורעים תאים. בתוך האינסרט יהיה מדיום ללא סרום, ומחוצה לו יהיה מדיום עם סרום. התאים שיעברו את הממברנה הם התאים הנודדים אשר ניתן למדוד אותם ע"י מיקרוסקופ או ע"י ספקטרופוטומטר. לרוב נבחר באינסרט בו גודל הפורות הוא 8 מיקרון. אם מדובר על תאי מערכת החיסון, נבחר באינסטים עם פורות קטנות יותר, 3 או 5 מיקרון.
ניסוי נוסף שמתבצע באמצעות אינסרטים הוא ניסוי co-culture, כלומר נרצה לזרוע תאים על האינסרט בצד אחד ותאים על הבארית עצמה ולראות אם ישנה השפעה של סוג תא אחד על אחר. במקרה זה נבחר אינסרט עם גודל פורות קטן יותר עליו התאים ממש יגדלו, 0.4 מיקרון ולא גדול יותר. דרך גודל פורות של 0.4 מיקרון התאים אינם יכולים לעבור ובעצם גדלים על גבי האינסרט.ישנם שני סוגים של אינסרטים בחברת Merck:1. אינסרטים שמגיעים עטופים אחד אחד2. אינסרטים שמגיעים בתוך קיט שלם עם כל המרכיבים ל-assay
אילו אינסרטים עדיפים? כעת אסקור את היתרונות והחסרונות של כל סוג.
1. אינסרטים שמגיעים עטופים אחד אחד:
האינסרטים שעטופים אחד אחד מאפשרים שמירה מירבית על סטריליות וחסכון במעבדה בדיוק בגלל הסיבה שהם עטופים אחד אחד.הם מאוד נוחים מאחר ומתאימים לכל הצלחות בשוק ולא נדרשת התאמת צלחת מיוחדת.האינסרטים שמגיעים עטופים אחד אחד אינם מצופים בחלבוני מטריקס, ולכן במידה ויש צורך לבצע ניסויי invasion עם ציפוי לאינסרטים, יש צורך לקנות את הציפוי באופן עצמאי, ולצפות ידנית, תוך המתנה של 24 שעות עד שהציפוי מוכן.חסרון נוסף: הציפוי לא תמיד יוצא אחיד בין האינסרטים השונים,מה שיכול לגרום לשונות בתוצאות.
גדלי פורות שקיימים: 8um, 5um, 1um, 3um, 0.4umהנפוצים ביותר בשימוש מעבדתי הם 8um ו- 0.4um, כאשר ה-0.4 מיקרון משמשים ל-co-culture, וה-8 מיקרוןמשמשים למבחני מיגרציה.גדלי הצלחות שאליהם מתאימים האינסרטים: 6-well, 12-well, 24- well
לרשימת האינסרטים שלנו
2. אינסרטים שמגיעים בתוך קיט שלם עם כל המרכיבים ל-assay:
למיליפור יש קיטים מוכנים כאשר הציפוי כבר מגיע מוכן על האינסרט, לא צריך לקנות את הציפוי בנפרד ולא צריך לבצע את הציפוי בצורה ידנית, זה פשוט מגיע מוכן. בנוסף, הקיטים מאפשרים מדידה כמותית של המיגרציה. בדרך כלל מצלמים את הממברנה עם התאים הצבועים במיקרוסקופ, ובקיטים המוכנים אפשר לעשות אילוציה לחומר הצביעה.הקיטים מגיעים 12 אינסרטים או 24 אינסרטים יחד עם צלחת מובנית. פירוט על כל קיט במדריך למשתמש המסודר שלו.
החומרים שמגיעים בתוך הקיט:• אינסרטים מצופים בקולגן/ פיברונקטין/ ויטרונקטין/ למינין/ECM+ צלחת 24-well 12 אינסרטים או 24 אינסרטים כתלות בקיט• אינסרטים לביקורת, מצופים ב-BSA• תמיסת צביעת תאים• תמיסה להוצאת הצבע מן התאים (למטרת מדידה כמותית)• מטוש לניקוי התאים מתוך הבארית
לרשימת הקיטים שלנו
יש לכם שאלות?תרצו להשתמש באינסרטים או בקיטים המוכנים שלנו לבדיקת מיגרציה של תאים?פנו אלי
עדי ג'רבימנהלת מכירות יחידת מוצרי מעבדה054-2288744[email protected]
מחברת המאמר,
עדי ג’רבי הינה בוגרת תואר ראשון בביולוגיה B.Sc. ותואר שני M.Sc. בביוטכנולוגיה מאוניברסיטת בר אילן.• עדי עובדת בחברת מרקורי משנת 2014 בצוות מדעי החיים. ויש לה ניסיון בבביולוגיה מולקולרית ובתחומים הבאים: Cloning, PCR, RNA extraction, RT-PCR, Protein extraction purification and concentration, Western blot, FACS, Cell culture, migration and invasion methods , 3D Organotypic culturing, Filtration solutions, Antibodies consulting, IP and chIP methods, Cell counting.• עדי גרבי השתתפה בקורסים והשתלמויות בתחומים: כרומטוגרפיה, מיקרוסקופיה ומדעי החיים .