היכולת לזהות חלבונים/אנליטים משפיע באופן משמעותי על יכולתנו לאבחן מחלות, לנטר את יעילותו של טיפול ושיפור הבנתנו לגבי תהליכים ביולוגים מורכבים. השיטה הטובה והמקובלת לזיהוי חלבונים הינה ה-ELISA.ELISA היא שיטה אימונולוגית מבוססת נוגדן המזהה אנליטים בדוגמא ביולוגית. אנליטים אלו קרואים בשפה האימונולוגית אנטיגנים. הנוגדנים אשר משמשים לזיהוי האנטיגן הינם ספציפיים לאפיטופים/ מרקרים המצויים על האנטיגן. שיטת ה- ELISA מציעה זיהוי מהיר, כמותי ורגיש של אנליטים בעלות נמוכה יחסית, מה שהופך אותה לשיטת בדיקה נפוצה מאוד במחקר.השיטה מאוד מפורסמת בתחומי מחקר האימונולוגיה לזיהוי פקטורים דלקתיים ואנטי דלקתיים כמו:TNF-a, MCP-1, IL-4, IL-10, IL-6 ,IL-8 ו- TGF-β בדוגמאות של סרום פלסמה או נוזל עליון של תאים ולא רק.כיום משתמשים ב- ELISA בכל תחומי המחקר ובמגוון מינים: מטבוליזם, סרטן, נוירוסיינס, לב, סיגנלינג ועוד.
פורמטים של ELISA:1. Sandwich ELISA:בפורמט זה משתמשים בשני נוגדנים ספציפיים לאפיטופים שונים על גבי אותו אנטיגן/חלבון, הסיגנל עולה עם העלייה בריכוז האנטיגן/ חלבון.
2. Competitive ELISA:בפורמט זה האנליט הנבדק בדוגמא, מתחרה באנליט מסומן מסחרי על היקשרות לנוגדן הספציפי. הסיגנל יורד ככל שיש יותר אנליט בדוגמא הנבדקת.
3. Signaling ELISA:בפורמט זה נשתמש לרוב במחקר של תהליכי סיגנלינג מבוססי פוספורלציה, ב ELISA זו מעורבים שני נוגדנים ספציפיים לזיהוי כמות כללית של החלבון ושל החלבון המפוספר בדוגמה.
4. MULTIPLEX ASSAY:זוהי שיטה המאפשרת בדיקה של מספר אנליטים בו זמנית, להבדיל מ- ELISA המסורתית המוגבלת לבדיקת אנליט אחד.השיטה עובדת על בסיס בידים המאפשרים את הבדיקה של מספר אנליטים, אלו בידים מסומנים פלורסנטית ב-500 גוונים שונים. הנוגדנים הספציפים לאנליט מסויים קשורים לבידים בגוון פלורוסנטי ספציפי. בידים בגווני פלורוסנציה שונה יקשרו ספציפית לאנליטים שונים. כלומר גוון הביד מקודד לסוג אנליט אותו הוא קושר.בעזרת נוגדן שניוני (biotinylated secondary antibody) וקשירתו של streptavidin-phycoerythrin אליו, ניתן אף לקבוע את ריכוז האנליט המדובר.מכשיר ה - Luminex באמצעותו נקראות התוצאות, מזהה את גוון הביד (at ex 635 nm) fluorescent שמציין את סוג האנליט אותו הוא קושר ואת הסיגנל שלstreptavidin-conjugated R-Phycoerythrin (SAPE) (ex 525 nm)אשר מעיד על נוכחות האנליט בדוגמא ובעזרת עקום כיול ניתן לחשב את ריכוזו בדוגמא.
טבלת השוואה בין ELISA ל- MULTIPLEX ASSAY:
ב - MULTIPLEX ASSAY קיימים כל הפורמטים הקיימים ב -ELISA, Sandwich ELISA, Competitive ELISA, Signaling ELISAובדומה ל- ELISA מעניק מענה במגוון מחקרים ומינים.במרקורי נוכל להציע מגוון רחב של ELISA וקיטים של MULTIPLEX ASSAY:1. ELISA assay 2. Conferma assay 3. MULTIPLEX ASSAYהקיטים הנפוצים ביותר:HCYTA-60K48-611MAGMCYTOMAG-70KEZHI-14KEZHCP-20KEZGRA-88K 2210 איזה אנליט תרצו לצרף למחקר הבא שלכם?מוזמנים לפנות אלי ואתאים לכם את הקיט הטוב עבורכם
פלורינה מישולוב מנהלת מכירות ומומחית למכשור ביולוגי052-6655322[email protected]
מחברת המאמר פלורינה מישלוב וייסביין , בוגרת תואר ראשון B.Sc. בהנדסת ביוטכנולוגיה ממכללת אורט בראודה , כרמיאל ותואר שני M.Sc. בביוכימיה מאוניברסיטת בר אילן , רמת גן.• לפלורינה מעל 10 שנות ניסון בתחום המחקר בתעשייה וחברות סטרטאפ שונות בינהם חברת טבע וחברת אקסלתא .מחברות אלו רכשה ניסיון רב בתחומים של שיטות ביולוגיות ומיומנויות עבודה בתרביות תאים.• בשנת 2018 הצטרפה פלורינה לחברת מרקורי , התחילה את עבודתה כמנהלת מכירות שטח האחראית על אזור צפון ובשנת 2021 קיבלה על עצמה תפקיד נוסף כמנהלת תחום המכשור הביולוגי ונותנת שירות אפליקטיבי.• בנוסף פלורינה הינה מתרגלת בקורס תרביות תאים במכללת אורט בראודה.