במחקר חלבונים כאשר הנכם מעונינים לבצע בדיקות פעילות וקישור בין חלבונים שונים, חשוב שהחלבונים שלכם יהיו במצב הנטיבי שלהם, שלא יאבדו מהפעילות האנזימטית או יכולות הקישור שלהם.
אחד מהשלבים בהכנת החלבונים על מנת להגיע לשלבים המתקדמים יותר, של בדיקות פעילות וקישור לחלבונים אחרים, הוא ריכוז החלבונים והגעה לנפח, כמות והרכב שמתאימים ל- assay. הכנה זו יכולה להיות לא פשוטה מכיון שכל חלבון מתנהג אחרת, בשל כמויות מאוד קטנות של חלבון או מסיבות אחרות. על מנת לתת מענה חכם ויעיל לחוקרים שרוצים לרכז את החלבונים שלהם, פותח ליין מוצרים שהפך למוצר פופולרי וידוע בקרב החוקרים, הלא הוא Amicon® Ultra Centrifugal filters.מבחנות Amicon® Ultra לריכוז חלבונים של Merck Millipore פותחו תוך התחשבות בכל הנקודות החשובות והרגישות הן לחוקר והן לחלבון ובעצם מרכזות בתוכם את כל היתרונות שיעזרו לכם בריכוז החלבונים.בפוסט זה אסקור את היתרונות כך שתוכלו להבין מה אתם מקבלים בכל פעם שאתם רוכשים אתמבחנות Amicon® Ultra לריכוז חלבונים ואיזה תועלות המוצר חובק בתוכו.Dead stop המבחנות בנויות כך שגם אם תרכזו את החלבונים למשך זמן רב לא יהיה מצב שבו הנוזל כולו יעבור את הממברנה אלא תמיד ישאר נוזל בדוגמה המקורית, והוא גם יהיה בנפח זהה גם אם משך הסרכוז היה ארוך מהרגיל. מבנה זה מגן על החלבון שלכם מבני יבוש, מפני פרסיפיטציה אפשרית, וחוסך לכם זמן בכך שאין צורך לבצע כיול במידה ומריצים מספר דוגמאות יחד.Reverse Spin Recovery בנפחים 0.5 ו- 2 מ"ל איסוף החלבון המרוכז נעשה עי הפיכת המבחנה הפנימית וסרכוז קצר. מבנה ייחודי זה מאפשר לכם קבלת תפוקה מכסימלית של החלבון, במיוחד כשיש דוגמאות קטנות, ומונע טעויות אפשריות כשמנסים לאסוף את החלבון בפיפטה.יתרון נוסף הוא בכך שמקבלים את כל הדוגמאות יחד (לאחר הסרכוז ההפוך) כך שחוסכים גם זמן. הממברנה מבחנות Amicon® Ultra בנויות כך שמכילות ממברנה שמאפשרת את מעבר הנוזלים וחלבונים החל מגודל מסוים דרכה. הממברנה היא Ultracel® Low-binding Membrane עשויה מ- regenerated cellulose בעלת תכונות של קישור נמוך מאוד של חלבונים כך שלא יהיה מצב של איבוד חלבונים שיספחו לממברנה, מה שגם מגדיל את התפוקה. לממברנה זו יש יתרון נוסף מכיון שהיא בעלת עמידות למגוון רחב של חומרים ולטווח pH רחב, 1-9, מה שיקל עליכם בשימוש במוצר אחד למגוון מרכיבים.מבנה הממברנה במבחנה: הממברנה בנויה כך שהיא יושבת בצורה אנכית למבחנה ולא אופקית. מבנה זה מאפשר הרבה פחות הצטברות של חלקיקים על גבי הממברנה במהלך הסרכוז. פחות חלקיקים שמצטברים מפעילים פחות לחץ על הממברנה ולכן נמנעת האפשרות שחלבונים רצויים יחזרו דרך הממברנה ויעברו אותה למרות גודלם.מבנה הממברנה ואופן החיבור בין הממברנה למבחנהיתרון נוסף וחשוב למבנה הממברנה במבחנה הוא אופן חיבור הממברנה למבחנה: הממברנה מחוברת עי חום (Heat-sealed membrane) מה שמהווה יתרון עצום וחשוב לעומת ממברנות שמחוברות ע"י דבקים. נוכחות של דבקים במבחנה שלכם בעת הסרכוז ובכלל, בנוכחות כימיקלים שונים גורם לכך שחומרי הדבק מתמוססים כך שהם מתווספים לדוגמה שלכם ועלוליל להפריע בהמשך התהליך ובנסיונות הבאים שלכם עם החלבונים שריכזתם. במבחנות מסוג Amicon® Ultra החיבור נעשה ע"י חום ולכן הדוגמה שלכם מוגנת ואין חשש כי יתווספו אליה חומרים לא רצויים.חסכון בזמן: סרכוז מהיר של עד 10 דקות מספיק בהחלט. במשך זמן קצר זה ניתן לקבל ריכוז של החל מפי 20 ועד פי 80.לסיכום, כשאתם משתמשים במבחנות Amicon® Ultra לריכוז החלבונים שלכם, אתם נהנים ממוצר חכם שמותאם בדיוק לצרכים שיש בעבודה עם חלבונים, כך שאתם יכולים להיות בטוחים שהחלבונים שלכם מוגנים ונקיים ובאותה הזדמנות לחסוך זמן ודאגות מיותרות. לעיון במגוון הגדלים וה- cut offs ולהסבר כיצד לבחור את המבחנה המתאימה והרוטור הנכון הקישו כאן.
הכנו סרטון אינפורמטיבי וחביב שיסביר לכם באפן ידידותי על השימוש והיתרונות באמיקונים
צרכים נפחים גדולים יותר? גם לזה ישל לנו סרטון ופתרון ב Stirred Cell, בואו לצפות.
אשמח אם תפנו אלי בכל שאלה.מירב [email protected]
מחברת המאמר, מירב גרבי הינה בוגרת תואר ראשון בביולוגיה B.Sc. ותואר שני M.Sc. בביוכימיה מאוניברסיטת בר אילן.• למירב גרבי ניסיון של 3 שנים בעבודת מחקר במחלקה ל Cellular and Developmental Biology בביה"ס לרפואה New York, Mount Sinai School of Medicine • במסגרת עבודה זו חקרה את ההבדלים בין Fibroblast growth factors -FGFs לבין FGF homologous factors FHFs ע"י השריית מוטציה בחלבונים רקומביננטיים והכנה פרפרטיבית של החלבונים לאנליזה בקריסטלוגרפיה.• למירב מומחיות בשיטות: ביולוגיה מולקולרית, יצירת קונסטרקטים , RT-PCR, PCR טרנספקיות וטרנספורמציות, ביטוי חלבונים בחידקים, מיצוי חלבונים, טיהור חלבונים בקולונות אפיניות להפרין, ניקל וגלוטטיון, פתרון בעיות אגרגציה ופרסיפיטציה של חלבונים, אנליזת חלבונים בשיטת ווסטרן, צביעות קומסי וצביעות כסף של ג'לים, טרנספקציה לתרביות תאים, מבחני MTT לתרביות תאים ועוד.• מ - 2006- מנהלת את תחום מדעי החיים בחברת מרקורי לאחר שבמשך כעשור ניהלה גם את תחום הכרומטוגרפיה • מירב גרבי השתתפה בקורסים והשתלמויות בתחומים: כרומטוגרפיה, מיקרוסקופיה ומדעי החיים בחברת Merck .