זיהוי חלבונים בשיטת Western
מאז שפותחה שיטת ה- Western blotting הפכה לשיטה הנפוצה והמוכרת ביותר לאנליזה של חלבונים. עקרון השיטה הינו הפרדה של תערובות חלבונים בג'ל אלקטרופורזה ולאחר מכן העברת החלבונים לממברנה כגון PVDF ומבצעים אימונודטקציה לזיהוי החלבונים. השיטה מאפשרת קבלת מידע על המשקל המולקולרי של החלבונים, אבחנה בין איזופורמים, עריכה ומודיפיקציה שהם עוברים. שיטה זו היא לרוב הבחירה הראשונה לבחינה של נוגדנים חדשים ולאבלואציה של- assays לאנליזה של חלבונים כגון ELISA, FACS, immunohistochemistry ועוד.ל- Western blotting לכל מעבדה יש את הפרוטוקול שלה שפותח לאורך השנים עם התאמות לאותה מעבדה ולחלבונים הספציפים שנחקרים. יש מעבדות שמשתמשות בתמיסות בהכנה עצמאית ויש מעבדות שרוכשות את התמיסות מוכנות. דווקא נכונות של מעבדות להחשף לחומרים חדשים בתחום יכולה להביא לשיפור הסיגנל, לקיצור זמנים ולחסכון בנוגדנים. לכן בחרתי לכתוב את הפוסט הזה על שיטת Western blotting במקביל לתקופה שבה יצאנו למבצע על מוצרי ווסטרן. אציג כאן מספר חידושים בתחום עם התועלות עבורכם, ויחד עם המבצע תוכלו לנסות מוצרים חדשים ללא עלות (ברכישת שני מוצרים השלישי חינם).
אשמח אם תפנו אלי בכל שאלה.מירב 052-4854147[email protected]
מחברת המאמר, מירב גרבי הינה בוגרת תואר ראשון בביולוגיה B.Sc. ותואר שני M.Sc. בביוכימיה מאוניברסיטת בר אילן.• למירב גרבי ניסיון של 3 שנים בעבודת מחקר במחלקה ל Cellular and Developmental Biology בביה"ס לרפואה New York, Mount Sinai School of Medicine • במסגרת עבודה זו חקרה את ההבדלים בין Fibroblast growth factors -FGFs לבין FGF homologous factors FHFs ע"י השריית מוטציה בחלבונים רקומביננטיים והכנה פרפרטיבית של החלבונים לאנליזה בקריסטלוגרפיה.• למירב מומחיות בשיטות: ביולוגיה מולקולרית, יצירת קונסטרקטים , RT-PCR, PCR טרנספקיות וטרנספורמציות, ביטוי חלבונים בחידקים, מיצוי חלבונים, טיהור חלבונים בקולונות אפיניות להפרין, ניקל וגלוטטיון, פתרון בעיות אגרגציה ופרסיפיטציה של חלבונים, אנליזת חלבונים בשיטת ווסטרן, צביעות קומסי וצביעות כסף של ג'לים, טרנספקציה לתרביות תאים, מבחני MTT לתרביות תאים ועוד.• מ - 2006- מנהלת את תחום מדעי החיים בחברת מרקורי לאחר שבמשך כעשור ניהלה גם את תחום הכרומטוגרפיה • מירב גרבי השתתפה בקורסים והשתלמויות בתחומים: כרומטוגרפיה, מיקרוסקופיה ומדעי החיים בחברת Merck .